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氨基柱測(cè)蔗糖是正向還是反向系統(tǒng)

更新時(shí)間:2022-08-29      點(diǎn)擊次數(shù):2225

氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中,例如LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中,但也有例外,像安捷倫的氨基柱保長(zhǎng)期保存要保存在純乙腈中,具體哪個(gè)廠家的柱子的保存方法要看柱子的說(shuō)明書,根據(jù)要求來(lái)保存。說(shuō)一下氨基柱的使用注意事項(xiàng)。
1. 正相使用
1.1 新柱子可直接用流動(dòng)相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再根據(jù)流動(dòng)相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速?zèng)_10倍柱體積,最后換成流動(dòng)相。
1.1 正相使用時(shí),不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動(dòng)相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過(guò)氧化物(質(zhì)量不好的乙mi、四氫呋喃含有少量)。
1.3 任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶。
2 反相使用
2.1 先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子。
2.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過(guò)11.0),立即用水( 0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動(dòng)相。
2.3 配制流動(dòng)相時(shí),應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。
2.4 反相條件下使用時(shí),要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。理想的pH范圍在pH 3.0-7.0
2.5 如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動(dòng)相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過(guò)渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
2.6 有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。
3 色譜柱的沖洗:簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái),正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法。
4 色譜柱的保存
4.1 正相使用時(shí),將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。
4.2 反相使用時(shí),如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;長(zhǎng)期不用時(shí)需將甲醇依次用異丙醇、氯仿置換,最后用正己烷保存。
5 色譜柱的再生
5.1 方案1:依次用甲醇、異丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、異丙醇、甲醇沖柱子(各以 0.5ml/min的流速,20倍柱體積),再換流動(dòng)相。這些清洗方法,主要是針對(duì)當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時(shí)的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等。
5.2 方案2:NH2柱用于反相條件時(shí),NH2鍵會(huì)水解,尤其是在該柱子pH范圍以外,在極酸性和堿性條件下柱壽命會(huì)下降很快,如果在這個(gè)條件下使用需要清洗一下,需要用10倍柱體積溶液沖洗,如下:
95%水/5%乙腈
THF四氫呋喃
95%乙腈/5%水
并保持95%乙腈/5%水繼續(xù)沖洗,以低流速0.2-0.5mL/min過(guò)夜沖洗。
5.3 方案3:柱子使用一定時(shí)間后,柱效下降,老化,也可清洗一下柱子恢復(fù)柱性能,清洗時(shí)依次用10倍柱體積的下列溶液沖洗:
95%水/5%乙腈
THF四氫呋喃
95%乙腈/5%水
再走流動(dòng)相即可

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